Kvantifikacija NAD+ in njegovih presnovkov v mišjih Išijatičnih živcih

Uvod

Ključni deli nikotinamid adenin dinukleotida (NAD+) in njegovih presnovkov pri staranju in nevrodegeneraciji so splošno znani. Da bi spodbudili napredek v smeri biokemičnih raziskav in intervencij, namenjenih staranju in nevrodegenerativnim boleznim, je zelo pomembno natančno količinsko opredeliti raven NAD+ in njenih metabolitov na poti reševanja NAD+. Tu se uporablja robustna in natančna metoda LC-MS/MS za kvantifikacijo ravni NAD+ in njegovih metabolitov v normalnem in poškodovanem išijatičnem živcu miši.

Omejitve obstoječih metod za kvantifikacijo NAD+ in njegovih metabolitov

Tradicionalne metode za kvantifikacijo NAD+ in njegovih metabolitov, kot so HPLC-UV, NMR, elektroforeza kapilarne cone ali kolorimetrični encimski testi, se soočajo z različnimi izzivi občutljivosti, selektivnosti in posrednega merjenja. Kar zadeva obstoječe teste LC-MS/MS za celične ali tkivne meritve NAD+ in njegovih metabolitov, je še vedno veliko težav, ki jih je treba premagati, kot so daljši čas delovanja, slabo kromatografsko zadrževalno vedenje in nezadovoljive oblike vrhov. Poleg tega lahko te metode zajemajo le eno do tri snovi na poti reševanja NAD+.

Spremembe metode LC-MS/MS

Na podlagi obstoječih testov LC-MS/MS se izvedejo spremembe kromatografskih pogojev, nadomestne matrice in pogojev MS/MS. Natančneje, 5 μM metilen fosfonske kisline se uporablja kot dodatek mobilne faze, ki izrecno spodbuja intenzivnost signala in obliko vrha. Glede na relativno čisto in preprosto naravo vzorcev, ki nikoli niso vzorci, in njihovo majhnost, se ultračista voda testira kot nadomestna matrika. Namesto hidrofilne interakcije kolone za tekočinsko kromatografijo in kolone s hiperogljikovimi hidrati se uporablja kolona Waters Atlantis Premier BEH C18 AX, katere edinstvena visokozmogljiva površinska tehnologija MaxPeak HPS (pasivizacija notranje stene kolone, odstranjevanje kovinske površine) omogoča visoko obnovljivost, simetrijo vrhov in ločitev bazne linije vseh analitov.Poleg tega so pogoji MS optimizirani za zmanjšanje interferenčnega signala NAD+ v kanalu ciklične adenozin difosfat riboze (cADPR), hkrati pa ohranjajo odziv cADPR in nikotinamid mononukleotida (NMN), s 4000V za ionsko napetost razpršila, 450 ° C za temperaturo turbo grelnika, 50 psi za plin 1, 50 psi za plin 2, 30 psi za plin za zavese in 12 psi za trčni plin.

Reprezentativni kromatogram živčnih vzorcev (normalni proti poškodovanim)

Vseh pet analitov doseže izhodiščno ločitev, kjer je cADPR občutljiv biomarker v modelu nevrodegeneracije. Tukaj aksotomija išijskega živca povzroči degeneracijo aksonov, kar vodi do zmanjšane ravni NAD+ in povišane ravni NMN v poškodovanih živcih, kar povzroči približno 2-kratno povečanje razmerja NMN / NAD+. Hkrati se ravni nikotinamida (NAM) in adenozin difosfat riboze (ADPR) znižajo za približno 2-krat, medtem ko se raven cADPR poveča za več kot 8-krat. Ti rezultati so skladni z rezultati predhodno poročanih raziskav, ki preverjajo točnost te spremenjene metode LS-MS/MS pri kvantifikaciji NAD+ in njegovih metabolitov.

Sklep

Ta spremenjena metoda LC-MS/MS omogoča učinkovito osnovno ločevanje NAD+, NMN, NAM, ADPR in cADPR v kratkem času izvajanja 5 minut, kar prispeva k zgodnjim diagnosticiranjem različnih nevroloških motenj in razvoju zdravil za staranje in nevrodegenerativne bolezni.

Referenčni

Ma Y, Deng L, Du Z. Razvoj in validacija metode LC-MS/MS za kvantifikacijo NAD+ in sorodnih metabolitov v Išijatičnih živcih miši in njena uporaba na živalskem modelu poškodbe živcev. J kromatogr A. doi:10.1016/j.chroma.2024.464821

BONTAC NAD

BONTACOd leta 2012 se posveča raziskavam in razvoju, proizvodnji in prodaji surovin za koencime in naravne izdelke, s tovarnami v lastni lasti, več kot 170 globalnimi patenti in močno ekipo za raziskave in razvoj. BONTAC ima bogate izkušnje z raziskavami in razvojem ter napredno tehnologijo na področju biosintezeNAD in njegove predhodne sestavine(npr. NMN in NR). Izbrati je treba različne vrste NAD, ki vključujejo stopnjo NAD ER (odstranjevanje endoksina), stopnjo I NAD (IVD/prehransko dopolnilo/kozmetični surovi prah), stopnjo NAD II (API/intermediati) in stopnjo IV NAD (če je katera koli višja zahteva glede topnosti), ki se lahko zagotovijo v obliki liofiliziranega prahu ali kristaliničnega prahu. Čistost zdravila BONTAC NAD lahko doseže več kot 98 %.

Disclaimer

Ta članek temelji na referenci v akademski reviji. Ustrezne informacije so na voljo samo za izmenjavo in učenje ter ne predstavljajo nobenega zdravniškega nasveta. Če pride do kršitve, se za izbris obrnite na avtorja. Stališča, izražena v tem članku, ne predstavljajo stališča odbora BONTAC. BONTAC v nobenem primeru ne bo odgovoren za kakršne koli zahtevke, škodo, izgube, izdatke ali stroške, ki izhajajo ali izhajajo neposredno ali posredno iz vašega zanašanja na informacije in gradiva na tem spletnem mestu.