Izjemne prednosti ultraobčutljivega ELISA s tio-NAD ciklom pri določanju proteina NS1 denge
1. 引言
Denga je akutna nalezljiva bolezen, ki jo povzročavirus denge prek pika okuženega komarja vrste Aedes (Ae. aegypti ali Ae. albopictus),z glavnimi simptomi, kot so visoka vročina, omotica, glavobol, izpuščaj inhudi bolečine (oči, mišic, sklepov ali kosti) itd. Ta bolezen je zelo razširjena v tropskih in subtropskih podnebjih. Ocenjuje se, da se vsako leto okuži 100 do 400 milijonov ljudi, pri čemer je več kot 80 % običajno blagih in asimptomatskih. Kljub temu lahko huda oblika denge poveča tveganje za smrt, če ni ustrezno zdravljena. Zato je zgodnja diagnoza te bolezni pomembna za njeno pravočasno zdravljenje.Pomembno je, da je nestrukturni protein 1 (NS1), visoko ohranjen glikoprotein, v glavnem izločen med okužbo zvirusomdenge, ki se intenzivno šteje za glavni patogenetski dejavnikdenge. Zato se NS1 običajno uporablja kot biomarker za zgodnje odkrivanje te bolezni.
V tej študiji se sendvič encimskoimunski test (ELISA) v kombinaciji sciklično metodo tio-nikotinamid adenin dinukleotida (tio-NAD/S-NAD)(v nadaljevanju imenovan ultrarazredni ELISA) uporablja za odkrivanje NS1, nato pa se primerja z NAAT za potrditev njegove natančnosti odkrivanja.
2. Prednosti in slabosti tradicionalnih metod odkrivanjadenge
Trenutnoobstajajo štiri glavne metode odkrivanja用于 denge.
Izolacija virusa in identifikacija imata visoko specifičnost, vendar sta časovno potratni, saj trajata vsaj 5 dni. Hitri antigenski test je najhitrejši in najbolj stroškovno učinkovit med drugimi metodami, vendar sta občutljivost in specifičnost relativno nizki. Serološki test na podlagi IgM in IgG je omejen z številom dni okužbe, saj je treba得到促进，test odložiti, dokler raven protiteles ne naraste na zaznavno raven.
V kliniki se NAAT pogosto uporablja za določanjedenge zaradi njegove visoke občutljivosti in specifičnosti. Vendar je ta metoda draga, naporna in nagnjena k lažno pozitivnim rezultatom, izvajati pa jo mora usposobljeno osebje.Za premagovanje slabosti teh metod se v tej študiji uporablja nova metoda odkrivanjaultrarazredni ELISA .
3. Delovni postopek ultrarazrednega ELISA s cikliranjem tio-NAD
Par protitelesje se uporablja za zajemanje proteina NS1 v sendvič ELISA, in alkalna fosfatazaje je označena na sekundarnem protitelesu. Poleg protiteles se androsteronski derivat, 3α-hidroksisteroid dehidrogenaza, tio-NAD in NADHpodobne uporabljajo za izgradnjo encimskega cikličnega sistema tio-NAD. Med ciklično reakcijo tio-NAD se tio-NADH nenehno kopiči na trikotni način in ga je mogoče neposredno izmeriti pri absorbanci 405 nm.
4. Primerjava ultrarazrednega ELISA in NAAT pri odkrivanju proteina NS1 virusa denge
V NAAT je 60 vzorcev pozitivnih na denge, 25 pa negativnih. Vrednost cikla (CT) NAAT za te pozitivne vzorce se je gibala od 12,42 do 31,41.V ultrarazrednem ELISA je 59 vzorcev ustrezno pozitivnih glede na rezultate NAAT, medtem ko je 25 vzorcev popolnoma ustrezno negativnih glede na rezultate NAAT.V primerjavi z NAAT sta občutljivost in specifičnost ultrarazrednega ELISA 98,3 % oziroma 100 % (tabela 2). Od 60 vzorcev bolnikov s potrjeno pozitivno denge z NAAT je le 1 vzorec negativen v ultrarazrednem ELISA. Podatki NAAT so pokazali, da je vzorec primer okužbe z DENV tipa 4 z vrednostjo CT 21,59. Rezultati ultrarazrednega ELISA so skoraj popolnoma skladni z rezultati NAAT, z vrednostjo kappa 0,972 (95 % IZ: 0,917-1.0).
5. 结论
UltrastrukturnoMetoda ultrarazrednega ELISA je enostavna za izvedbo in ne zahteva profesionalnih pripravnikov za upravljanje. TOdkrivanje se lahko začne takoj po prejemu majhnega vzorca. Posebej primerna je za zgodnje odkrivanjevirusombolezni v državah z nizkimi dohodki.Literatura
Chen, Po-Kai et al. “Advanced Detection Method for Dengue NS1 Protein Using Ultrasensitive ELISA with Thio-NAD Cycling.” Viruses vol. 15,9 1894. 8 Sep. 2023, doi:10.3390/v15091894Prednosti in značilnosti izdelkaBONTAC Tio-NAD/S-NAD
BONTAC je eno od redkih podjetij vKitajska ki lahko proizvaja tio-NAD škodljivih ostankov topil“Bonzyme” Celofencimska metoda (, brez; brez škodljivih ostankov topil) in edinstvena “Bonpure” sedemstopenjska tehnologija čiščenja. BONTAC združuje raziskave in razvoj, proizvodnjo in prodajo, z lastnimi tovarnami in številnimi mednarodnimi certifikati za zagotavljanje visoke kakovosti in stabilne dobave izdelkov.
