Kvantifikacija NAD + in njegovih presnovkov v mišjih išijasnih živcih
Uvod
Ključni deli nikotinamid adenin dinukleotida (NAD +) in njegovi metaboliti pri staranju in nevrodegeneraciji so splošno priznani. Da bi spodbudili napredek pri biokemičnih raziskavah in posegih, usmerjenih v staranje in nevrodegenerativne bolezni, je zelo pomembno natančno količinsko opredeliti NAD + in njegove ravni metabolitov v reševalni poti NAD +. Tukaj se uporablja robustna in natančna metoda LC-MS / MS za kvantifikacijo ravni NAD + in njegovih metabolitov v normalnem in poškodovanem mišjem išijatičnem živcu.
Omejitve obstoječih metod za količinsko opredelitev NAD + in njegovih metabolitov
Tradicionalne metode za kvantifikacijo NAD + in njegovih metabolitov, kot so HPLC-UV, NMR, elektroforeza kapilarne cone ali kolorimetrični encimski testi, se soočajo z različnimi izzivi pri občutljivosti, selektivnosti in posrednem merjenju. Kar zadeva obstoječe LC-MS / MS teste za celične ali tkivne meritve NAD + in njegovih metabolitov, je še vedno veliko težav, ki jih je treba premagati, kot so podaljšani časi delovanja, slabo kromatografsko zadrževanje in nezadovoljive oblike vrhov. Poleg tega je s temi metodami mogoče zajeti le eno do tri snovi v reševalni poti NAD +.
Spremembe metode LC-MS/MS
Na podlagi obstoječih preskusov LC-MS/MS se izvedejo spremembe glede kromatografskih pogojev, nadomestnega matriksa in MS/MS pogojev. Natančneje, 5 μM metilen fosfonske kisline se uporablja kot dodatek mobilne faze, ki izrecno spodbuja intenzivnost signala in obliko vrha. Glede na relativno čisto in preprosto naravo vzorcev nikoli in njihovo majhnost se ultračista voda preizkuša kot nadomestna matrica. Namesto kolone za tekočinsko kromatografijo s hidrofilno interakcijo in kolone s hiperogljikovimi hidrati se uporablja kolona Waters Atlantis Premier BEH C18 AX, katere edinstvena visoko zmogljiva površinska tehnologija MaxPeak HPS (pasivizacija notranje stene kolone, odstranjevanje kovinske površine) omogoča visoko obnovljivost, simetrijo vrhov in ločevanje bazne linije vseh analitov.Poleg tega so pogoji MS optimizirani tako, da zmanjšajo interferenčni signal NAD + v kanalu ciklične adenozin difosfat riboze (cADPR), hkrati pa ohranjajo odziv cADPR in nikotinamid mononukleotida (NMN), s 4000V za ionsko razpršilno napetost, 450 ° C za temperaturo turbo grelnika, 50 psi za plin 1, 50 psi za plin 2, 30 psi za plin zavese in 12 psi za plin trka.
Reprezentativni kromatogram živčnih vzorcev (normalni vs poškodovani)
Vseh pet analitov doseže izhodiščno ločevanje, kjer je cADPR občutljiv biomarker v modelu nevrodegeneracije. Pri tem aksotomija išijatičnega živca povzroči degeneracijo aksonov, kar vodi do zmanjšane ravni NAD + in povišane ravni NMN v poškodovanih živcih, kar povzroči približno 2-kratno povečanje razmerja NMN / NAD +. Hkrati se ravni nikotinamida (NAM) in adenozin difosfat riboze (ADPR) zmanjšajo za približno 2-krat, medtem ko se raven cADPR poveča za več kot 8-krat. Ti rezultati so skladni s tistimi iz predhodno poročanih raziskav, ki potrjujejo točnost te spremenjene metode LS-MS / MS pri kvantifikaciji NAD + in njegovih metabolitov.
Sklep
Ta modificirana metoda LC-MS/MS omogoča učinkovito izhodiščno ločevanje NAD +, NMN, NAM, ADPR in cADPR v kratkem času 5 minut, kar prispeva k zgodnjim diagnozam različnih nevroloških motenj in razvoju zdravil za staranje in nevrodegenerativne bolezni.
Referenčni
Ma Y, Deng L, Du Z. Razvoj in validacija metode LC-MS/MS za kvantifikacijo NAD + in sorodnih metabolitov pri mišjih išijatičnih živcih in njena uporaba na živalskem modelu z živčno poškodbo. J Chromatogr A. doi:10.1016/j.chroma.2024.464821
BONTAC NAD
BONTACse od leta 2012 posveča raziskavam in razvoju, proizvodnji in prodaji surovin za koencime in naravne proizvode, s tovarnami v lastni lasti, več kot 170 svetovnimi patenti ter močno ekipo za raziskave in razvoj. BONTAC ima bogate izkušnje na področju raziskav in razvoja ter napredno tehnologijo v biosinteziNAD in njegovi predhodniki(npr. NMN in NR). Izbrati je treba različne vrste NAD, ki zajemajo NAD ER Grade (odstranjevanje endoksina), NAD Grade I (IVD / prehransko dopolnilo / kozmetični surov prah), NAD Grade II (API / vmesni izdelki) in NAD Grade IV (če obstaja višja zahteva glede topnosti), ki se lahko zagotovijo v obliki liofiliziranega prahu ali kristalnega prahu. Čistost BONTAC NAD lahko doseže nad 98%.
Disclaimer
Ta članek temelji na referenci v akademski reviji. Ustrezne informacije so na voljo samo za namene izmenjave in učenja in ne predstavljajo nobenega zdravniškega svetovanja. Če pride do kakršne koli kršitve, se obrnite na avtorja za izbris. Stališča, izražena v tem članku, ne predstavljajo stališča BONTAC-a. V nobenem primeru BONTAC ne bo odgovoren za kakršne koli zahtevke, škodo, izgube, stroške ali stroške, ki izhajajo ali izhajajo neposredno ali posredno iz vašega zanašanja na informacije in gradivo na tej spletni strani.