Kvantifikacija NAD+ in njegovih metabolitov v mišjih išijatičnih živcih
Uvod
Ključni deli nikotinamid adenin dinukleotida (NAD +) in njegovih metabolitov pri staranju in nevrodegeneraciji so bili splošno priznani. Da bi spodbudili napredek pri biokemičnih raziskavah in intervencijah, usmerjenih v staranje in nevrodegenerativne bolezni, je zelo pomembno, da natančno kvantificiramo NAD + in njegove ravni metabolitov na poti reševanja NAD +. Tukaj se uporablja robustna in natančna metoda LC-MS / MS za kvantifikacijo ravni NAD + in njegovih metabolitov v normalnem in poškodovanem mišjem išijatični živec.
Omejitve obstoječih metod za količinsko opredelitev NAD + in njegovih metabolitov
Tradicionalne metode za kvantifikacijo NAD + in njegovih metabolitov, kot so HPLC-UV, NMR, elektroforeza kapilarne cone ali kolorimetrični encimski testi, se soočajo z različnimi izzivi pri občutljivosti, selektivnosti in posrednem merjenju. Kar zadeva obstoječe LC-MS/MS teste za celične ali tkivne meritve NAD + in njegovih metabolitov, je še vedno treba premagati veliko težav, kot so podaljšani časi delovanja, slabo kromatografsko retencijsko vedenje in nezadovoljive oblike vrhov. Poleg tega je mogoče s temi metodami zajeti le eno do tri snovi na poti reševanja NAD +.
Spremembe metode LC-MS/MS
Na podlagi obstoječih testov LC-MS/MS se izvedejo spremembe glede kromatografskih pogojev, nadomestne matrice in pogojev MS/MS. Natančneje, 5 μM metilen fosfonske kisline se uporablja kot dodatek mobilne faze, ki izrecno spodbuja intenzivnost signala in obliko vrha. Glede na razmeroma čisto in preprosto naravo vzorcev in njihovo majhnost se ultračista voda preizkuša kot nadomestna matrica. Namesto hidrofilne interakcije s tekočinsko kromatografsko kolono in hiperkarbno kolono se uporablja kolona Waters Atlantis Premier BEH C18 AX, katere edinstvena visokozmogljiva površinska tehnologija MaxPeak HPS (pasivizacija notranje stene kolone, odstranjevanje kovinske površine) omogoča visoko ponovljivost, simetrijo vrhov in ločevanje osnovnih linij vseh analitov.Poleg tega so pogoji MS optimizirani za zmanjšanje motečega signala NAD + v kanalu ciklične adenozin difosfat riboze (cADPR), hkrati pa ohranjajo odziv cADPR in nikotinamid mononukleotida (NMN), s 4000 V za napetost ionskega razprševanja, 450 ° C za temperaturo turbo grelnika, 50 psi za plin 1, 50 psi za plin 2, 30 psi za plin za zavese in 12 psi za trčni plin.
Reprezentativni kromatogram vzorcev živcev (normalni proti poškodovanim)
Vseh pet analitov doseže izhodiščno ločevanje, kjer je cADPR občutljiv biomarker v modelu nevrodegeneracije. Pri tem aksotomija išijatičnega živca povzroči aksonsko degeneracijo, kar vodi do zmanjšane ravni NAD + in povišane ravni NMN v poškodovanih živcih, kar povzroči približno 2-kratno povečanje razmerja NMN / NAD +. Hkrati se ravni nikotinamida (NAM) in adenozin difosfat riboze (ADPR) zmanjšajo za približno 2-krat, medtem ko se raven cADPR poveča za več kot 8-krat. Ti rezultati so skladni s tistimi iz predhodno poročanih raziskav, ki preverjajo natančnost te spremenjene metode LS-MS/MS pri kvantifikaciji NAD + in njegovih metabolitov.
Sklep
Ta modificirana metoda LC-MS / MS omogoča učinkovito izhodiščno ločevanje NAD +, NMN, NAM, ADPR in cADPR v kratkem času delovanja 5 minut, kar prispeva k zgodnjim diagnozam različnih nevroloških motenj in razvoju zdravil za staranje in nevrodegenerativne bolezni.
Referenčni
Ma Y, Deng L, Du Z. Razvoj in validacija metode LC-MS/MS za kvantifikacijo NAD + in sorodnih metabolitov pri išijatičnih živcih miši ter njena uporaba na živalskem modelu z poškodbo živcev. J Chromatogr A. doi:10.1016/j.chroma.2024.464821
BONTAC NAD
BONTAC se od leta 2012 posveča raziskavam in razvoju, proizvodnji in prodaji surovin za koencime in naravne izdelke, z lastnimi tovarnami, več kot 170 globalnimi patenti in močno ekipo za raziskave in razvoj. BONTAC ima bogate izkušnje na področju raziskav in razvoja ter napredno tehnologijo na področju biosinteze NAD in njegove predhodne sestavine (npr. NMN in NR). Na izbiro je treba različne vrste NAD, ki vključujejo razred NAD ER (odstranjevanje endoksina), razred NAD I (IVD / prehransko dopolnilo / kozmetični surovi prah), razred NAD II (API / vmesni produkti) in razred IV NAD (če obstaja višja zahteva glede topnosti), ki se lahko zagotovi v obliki liofiliziranega prahu ali kristalnega prahu. Čistost BONTAC NAD lahko doseže več kot 98 %.
Disclaimer
Ta članek temelji na referenci v akademski reviji. Ustrezne informacije so na voljo samo za namene izmenjave in učenja in ne predstavljajo nobenih medicinskih nasvetov. Če pride do kršitve, se za izbris obrnite na avtorja. Stališča, izražena v tem članku, ne predstavljajo stališča skupine BONTAC. V nobenem primeru BONTAC ne bo odgovoren za kakršne koli zahtevke, škodo, izgube, izdatke ali stroške, ki izhajajo ali izhajajo neposredno ali posredno iz vašega zanašanja na informacije in gradivo na tej spletni strani.