Izjemne prednosti ultrasenzitivne ELISA s cikliranjem tio-NAD pri določanju beljakovine denga NS1

1. Uvod

Mrzlica denga je akutna nalezljiva bolezen, ki jo povzroča Virus dengaz ugrizom okužene vrste Aedes (Ae. aegypti ali Ae. albopictus) komarjev, z glavnimi simptomi, kot so visoka zvišana telesna temperatura, omotica, glavobol, izpuščaj in Hudabolečine (bolečine v očeh, mišicah, sklepih ali kosteh) itd. Ta bolezen je zelo razširjena v tropskih in subtropskih podnebjih. Ocenjuje se, da je vsako leto okuženih od 100 do 400 milijonov ljudi, pri čemer je več kot 80% običajno blagih in asimptomatskih. Kljub temu lahko huda mrzlica denga poveča tveganje za smrt, če se ne zdravi pravilno. Tako je zgodnja diagnoza te bolezni pomembna za njeno pravočasno zdravljenje.

Omeniti velja, da se nestrukturni protein 1 (NS1), visoko ohranjen glikoprotein, izloča predvsem med okužbo Dengue virus, ki se intenzivno obravnava kot glavni dejavnik patogeneze Mrzlica denga. Zato se NSI na splošno uporablja kot biomarker za zgodnje odkrivanje te bolezni.

V tej študiji je sendvič encimski imunski test(ELISA)v kombinaciji z tio nikotinamid adenin dinukleotid (tio-NAD/S-NAD) kolesarska metoda (v nadaljnjem besedilu: ultrasenzitivna ELISA) se uporablja za odkrivanje NSI, čemur sledi primerjava z NAAT, da se potrdi njegova natančnost zaznavanja.

2. Prednosti in slabosti tradicionalnih metod odkrivanja za Mrzlica denga 

Trenutno je tTukaj so štirje glavni načini odkrivanja za Mrzlica denga.


Izolacija in identifikacija virusa imata visoko specifičnost, vendar sta dolgotrajna in trajata vsaj 5 dni. Hitri antigenski test je najhitrejši in stroškovno najučinkovitejši med drugimi metodami, vendar sta občutljivost in specifičnost razmeroma nizki. Serološki test, ki temelji na IgM in IgG, je omejen s številom dni okužbe, saj T test je treba odložiti, dokler se raven protiteles ne dvigne na zaznavno raven.

V kliniki se NAAT pogosto uporablja za določanje Mrzlica dengaz umazanijo visoke občutljivosti in specifičnosti. Vendar pa je ta metoda draga, težavna in nagnjena k lažni pozitivnosti, ki jo mora izvajati usposobljeno osebje. Da bi premagali slabosti teh metod, je nova metoda odkrivanja ultraobčutljiva ELISA je uporabljeno v tej študiji.

3. Potek dela ultraobčutljivega testa ELISA s kolesarjenjem tio-NAD

Par protiteles Jeuporablja se za zajemanje beljakovine NS1 v sendviču ELISA in alkalne fosfataze Jeoznačene na sekundarnem protitelesu. Poleg protiteles so derivat androsterona, 3α-hidroksisteroidna dehidrogenaza, tio-NAD in NADH Souporablja se za izdelavo encimskega cikličnega sistema tio-NAD. Med ciklično reakcijo tio-NAD se je tio-NADH nenehno kopičil v trikotnem številu in ga je bilo mogoče neposredno izmeriti pri absorbanci 405 nm.

4. Primerjava ultraobčutljivih ELISA in NAAT pri odkrivanju beljakovin Denga NS1

V NAAT je 60 primerkov pozitivnih na dengo, 25 pa na dengo. Vrednost cikličnega praga NAAT (CT) teh vzorcev, pozitivnih na dengo, se je gibala od 12,42 do 31,41. V ultraobčutljivi ELISA je 59 vzorcev ustrezno pozitivnih na rezultate NAAT, medtem ko je 25 vzorcev popolnoma negativnih glede na rezultate NAAT.

V primerjavi z NAAT sta občutljivost in specifičnost ultraobčutljivega testa ELISA 98,3 % oziroma 100 % (preglednica 2). Od 60 NAAT-potrjenih vzorcev bolnikov z dengo je le 1 vzorec negativen v ultraobčutljivi ELISA. Podatki NAAT so pokazali, da je vzorec primer okužbe z DENV tipa 4 z vrednostjo CT 21,59. Rezultati ultraobčutljivega testa ELISA se skoraj popolnoma ujemajo z rezultati NAAT, z vrednostjo kappa 0,972 (95% IZ: 0,917-1.0).

5. Zaključek

Ultraobčutljiva metoda ELISA je enostavna za izvedbo in ne zahteva profesionalnih pripravnikov. Odkrivanje se lahko začne takoj po prejemu majhnega vzorca. Še posebej je primeren za zgodnje odkrivanje bolezni denga v državah z nizkimi dohodki.

Referenčni

Chen, Po-Kai et al. "Napredna metoda odkrivanja beljakovine Dengue NS1 z uporabo ultraobčutljive ELISA s kolesarjenjem Thio-NAD." Virusi, vol. 15,9, 1894. 8. september 2023, doi:10.3390/v15091894

Prednosti in značilnosti izdelka BONTAC Thio-NAD/S-NAD

BONTAC je one od redkih podjetij v Kitajskaki lahko proizvede Thio-NADs "Bonzyme"Celoencimska metoda(okolju prijazen;brez škodljivih ostankov topil) in edinstvena sedemstopenjska tehnologija čiščenja "Bonpure". BONTAC združuje raziskave in razvoj, proizvodnjo in prodajo z tovarne v lastni lasti in številni mednarodni certifikati za zagotavljanje visoke kakovosti in stabilne dobave izdelkov.

Disclaimer

BONTAC ne prevzema nobene odgovornosti za kakršne koli zahtevke, ki izhajajo neposredno ali posredno iz vašega zanašanja na informacije in gradivo na tej spletni strani.