Izjemne prednosti ultrasenzitivne ELISA s Thio-NAD kolesarjenjem pri določanju proteina Dengue NS1

1. Uvod

Mrzlica denga je akutna nalezljiva bolezen, ki jo povzročaVirus dengazaradi ugriza okuženih komarjev vrste Aedes (Ae. aegypti ali Ae. albopictus),z glavnimi simptomi, kot so visoka vročina, omotica, glavobol, izpuščaj inHudabolečine (bolečine v očeh, mišicah, sklepih ali kosteh) itd. Ta bolezen je zelo razširjena v tropskih in subtropskih podnebjih. Ocenjuje se, da je vsako leto okuženih od 100 do 400 milijonov ljudi, pri čemer je več kot 80% običajno blagih in asimptomatskih. Kljub temu lahko huda mrzlica Dengue poveča tveganje za smrt, če se ne zdravi pravilno. Zato je zgodnja diagnoza te bolezni pomembna za njeno pravočasno zdravljenje.

Omeniti je treba, da se nestrukturni protein 1 (NS1), visoko ohranjen glikoprotein, izloča predvsem med okužboDenguevirus, ki se intenzivno šteje za glavni dejavnik patogenezeMrzlica denga. Zato se NSI na splošno uporablja kot biomarker za zgodnje odkrivanje te bolezni.

V tej študiji je bil imunosorbentni test, povezan s sendvič encimi,(ELISA)v kombinaciji ztiotinamid adenin dinukleotid (tio-NAD/S-NAD)kolesarska metoda (v nadaljnjem besedilu ultrasenzitivni test ELISA) se uporablja za odkrivanje NSI, ki mu sledi primerjava z NAAT za potrditev njegove natančnosti zaznavanja.

2. Prednosti in slabosti tradicionalnih metod odkrivanjaMrzlica denga 

Trenutno tTu so štiri glavne metode odkrivanjaza Mrzlica denga.


Virusna izolacija in identifikacija imata visoko specifičnost, vendar sta zamudna in trajata vsaj 5 dni. Hitri antigenski test je najhitrejši in stroškovno najučinkovitejši med drugimi metodami, vendar sta občutljivost in specifičnost razmeroma nizki. Serološki test na osnovi IgM in IgG je omejen s številom dni okužbe, kotTest je treba odložiti, dokler se raven protiteles ne dvigne na zaznavno raven.

V kliniki se NAAT pogosto uporablja za določanjeMrzlica dengaz umazanijo visoke občutljivosti in specifičnosti. Vendar pa je ta metoda draga, težavna in nagnjena k lažni pozitivnosti, ki jo mora izvajati usposobljeno osebje.Da bi premagali slabosti teh metod, je nova metoda odkrivanjaultrasenzitivna testa ELISA je uporabljeno v tej študiji.

3. Potek dela ultraobčutljivega testa ELISA s kolesarjenjem tio-NAD

Par protitelesJeuporablja se za zajemanje beljakovine NS1 v sendviču ELISA in alkalne fosfatazeJeoznačeno na sekundarnem protitelesu. Poleg protiteles je derivat androsterona, 3α-hidroksisteroid dehidrogenaza, tio-NAD in NADHSouporablja se za izgradnjo sistema cikličnega cikla tio-NAD. Med reakcijo cikliranja tio-NAD se je tio-NADH nenehno kopičil v trikotnem številu in ga je bilo mogoče neposredno izmeriti pri absorbanci 405 nm.

4. Primerjava ultrasenzitivnih ELISA in NAAT pri odkrivanju proteina Dengue NS1

V NAAT je 60 primerkov pozitivnih na dengue, 25 pa na dengue. Vrednost praga cikliranja NAAT (CT) teh vzorcev pozitivnih na dengo se je gibala od 12,42 do 31,41.V ultrasenzitivni ELISA je 59 vzorcev ustrezno pozitivnih na rezultate NAAT, medtem ko je 25 vzorcev popolnoma ustrezno negativnih na rezultate NAAT.

V primerjavi z NAAT sta občutljivost in specifičnost ultrasenzitivne testa ELISA 98,3 % oziroma 100 % (preglednica 2). Od 60 vzorcev bolnikov, pozitivnih na dengo, potrjenih z NAAT, je le 1 vzorec negativen v ultrasenzitivni ELISA. Podatki NAAT so pokazali, da je vzorec primer okužbe z DENV tipa 4 s CT vrednostjo 21,59. Rezultati ultrasenzitivne ELISA se skoraj popolnoma ujemajo z rezultati NAAT, z vrednostjo kappa 0,972 (95% IZ: 0,917-1.0).

5. Zaključek

Ultrasenzitivna metoda ELISA je enostavna za izvedbo in za delovanje ne zahteva profesionalnih pripravnikov. Odkrivanje se lahko začne takoj po prejemu majhnega vzorca. Še posebej je primeren za zgodnje odkrivanje bolezni denga v državah z nizkimi dohodki.

Referenčni

Chen, Po-Kai et al. "Napredna metoda odkrivanja proteina Dengue NS1 z uporabo ultrasenzitivne ELISA s kolesarjenjem Thio-NAD." Virusi vol. 15,9 1894. 8. september 2023, doi:10.3390/v15091894

Prednosti in značilnosti izdelkaBONTAC Thio-NAD/S-NAD

BONTAC je oNe od redkih podjetij vKitajskaki lahko proizvede Thio-NADs"Bonzyme"Celotna encimska metoda(okolju prijazen;brez škodljivih ostankov topil) in edinstvena sedemstopenjska tehnologija čiščenja "Bonpure". BONTAC združuje raziskave in razvoj, proizvodnjo in prodajo z lastne tovarne in številni mednarodni certifikati za zagotavljanje visoke kakovosti in stabilne dobave izdelkov.

Disclaimer

BONTAC ne odgovarja za kakršne koli zahtevke, ki izhajajo neposredno ali posredno iz vašega zanašanja na informacije in gradiva na tej spletni strani.